沃辛顿组织分离指南

介绍

组织解离/原代细胞分离和细胞收获是组织培养研究和细胞生物学研究中酶的主要应用。  尽管这些年来酶在这些应用中被广泛使用，但是它们在解离和收获中的作用机理还没有被很好地理解。  结果，一种技术对另一种技术的选择通常是任意的，并且更多地基于过去的经验，而不是基于对这种方法为何起作用以及哪些修改可以带来更好结果的理解。

细胞分离程序的目的是使功能上可行的，解离的细胞的产量最大化。  有许多参数可能会影响任何特定过程的结果，包括但不限于：

1.    组织类型

2.    起源物种

3.    动物的年龄

4.    基因改造（敲除等）

5.    使用的解离介质

6.     使用的酶

7.    使用的任何粗酶制剂中的杂质

8.    所用酶的浓度

9.    温度

10.  孵化时间

前四个项目通常不是选择问题。  为了获得合适的结果，最好根据经验定义其他可变条件。

在科学文献中搜索有关理想酶和组织解离的最佳条件的信息的研究人员经常面临相互矛盾的数据。  许多变化源于细胞外基质的复杂和动态特性，以及源于细胞分离应用的相对粗略，不确定的酶制剂的历史使用。  而且，细胞外基质由多种蛋白质，糖蛋白，脂质和糖脂组成，所有这些蛋白质在物种之间，组织之间和发展年龄方面的丰度都可能不同。  常用的粗酶制剂（例如Pronase，NF 1：250和胶原酶）包含几种浓度可变的蛋白酶，以及多种多糖酶，核酸酶和脂肪酶。