关于worthington的常见问题解答？

1.1。NCIS套件可用于成人吗？

NCIS试剂盒专门包装用于五个独立的组织分离，每个组织最多包含十二个新生大鼠心脏。NCIS协议可从 www.worthington-biochem.com/NCIS/default.html 在线获得。我们有经过修改的成年大鼠心肌细胞分离教程，可以应要求传真，建议使用Langendorf灌注系统和II型胶原酶。

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1.2。您出售的Hank，Earle和Leibovitz L-15媒体的数量是多少？

NCIS（新生儿心肌细胞分离系统）套件中提供了无钙和镁的无菌Hank平衡盐溶液，第7.4页。可以购买500毫升的瓶子，商品目录号LK003210为$ 42。
 
NCIS套件还包含一袋Leibovitz L-15培养基粉。将小袋的全部内容物重新放入装有800ml细胞培养级水的烧杯中。再用100ml的水冲洗2-3次。将总体积升至1升，然后通过0.22微米孔径的过滤器进行过滤。装有1升Leibovitz L-15培养基粉末的小袋，目录号LK003250为$ 18。
 
PDS（木瓜蛋白酶解离系统）套件提供了含钙，镁，碳酸氢盐和酚红的无菌厄尔平衡盐溶液（EBSS）。可以购买100毫升瓶，目录号LK003182为40美元。

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2.1.1。胶原酶（CLS）可接受的酶稀释剂是什么？

胶原酶可直接溶于平衡的盐溶液或所选的缓冲液中。应该通过0.22um孔径的膜进行无菌过滤。其最佳pH范围是7-9。需要钙。最平衡的盐溶液具有足够的钙。胶原酶被金属螯合剂如半胱氨酸，EDTA或邻菲咯啉抑制。对于我们的测定，我们将其溶于0.05M TES和0.36mM pH 7.5的氯化钙中

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2.1.2。什么是Dispase（DISP）可接受的酶稀释剂？

Dispase可以溶于水，平衡盐溶液或所选的缓冲液中。钙是类似于胶原酶的活化剂。

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2.1.3。脱氧核糖核酸酶（D / DPFF / DPRF）可接受的酶稀释剂是什么？

D / DPFF：可溶于5mM乙酸盐，1mM钙，pH 4.5，并以-20或-70的单次使用等份保存1年。

DPRF：使用水或除磷酸盐以外的任何pH 4-9的缓冲液，避免钙螯合剂，添加50％甘油以-20°C的液体形式存储。等分试样避免重复的冷冻/解冻循环。

脱氧核糖核酸酶必须特别小心。轻轻混合以避免剪切变性。通常，Dnase I被二价金属激活。用Mg +和Ca +可以达到最大活化。Dnase I被EDTA和SDS抑制。来自牛胰腺的脱氧核糖核酸酶I的最佳pH为7.8。

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2.1.4。弹性蛋白酶（ES）可接受的酶稀释剂是什么？

弹性蛋白酶在中性pH下溶解性差，浓度大于0.25％。在稀释到反应混合物或介质中之前，先在KCl或碱性缓冲液中制备初级溶液，有助于补偿离子强度或pH值变化。弹性蛋白酶在pH 4.0-10.4（最佳pH 8.5）下稳定。弹性蛋白酶在pH值低于3.5时不稳定。使用前，应将弹性蛋白酶通过0 / .22um孔径的膜进行无菌过滤。不要冻结。

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2.1.5。木瓜蛋白酶（PAP / PAP2）可接受的酶稀释剂是什么？

酶应在包含1.1mM EDTA，0.067mM巯基乙醇和5.5mM半胱氨酸-HCL的溶液中使用30分钟后完全活化。木瓜蛋白酶被半胱氨酸，硫化物和亚硫酸盐激活。稳定剂是EDTA，半胱氨酸和二巯基乙醇。不要冻结水悬浮液。最适pH范围是6.0-7.0。

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2.1.6。胰蛋白酶（TRL）可接受的酶稀释剂是什么？

胰蛋白酶的储备溶液应首先通过在0.001N HCl中复溶来制备。该溶液可以在使用前立即在消化介质或缓冲液中稀释。胰蛋白酶的最佳pH值约为8.0。

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2.2.1。胶原酶（CLS）单位的转换因子是多少？

不幸的是，Wunsch和Mandl单位之间没有一致的转换单位。
沃辛顿测定法基于改良的Mandl单位。0.15 Wunsch单位等于200 Mandl单位。

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2.2.2。脱氧核糖核酸酶（D / DP / DPRFF）单位的转换因子是多少？

注意：其他供应商报告的Kunitz单位可能比Worthington测量的Kunitz单位高2-4倍。在沃辛顿0.005 Kunitz结构单元消化1微克的λ的DNA在50μl的一个反应中，在37℃在50mM的Tris 10分钟，1 mMMg ++，pH值7.8。对于其他DNA和缓冲液系统，消化单位与Kunitz单位的相关性有所不同。如果存在蛋白酶，则无法关联单位。

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2.2.3。胰蛋白酶（TRL）单位的转换因子是多少？

1 mg TRL> 180 TAME单位> 10,350 BAEE单位> 3,450 USP / NF单位

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2.3。酶消化的规模是多少？

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2.4.1。四种胶原酶之间的基本区别是什么？

一号	包含平均分析活性（胶原酶，酪蛋白酶，胰蛋白酶和梭菌蛋白酶）。推荐用于上皮，肝（肝细胞），肺，脂肪（脂肪细胞）和肾上腺细胞分离。
CLS 2	包含更大的蛋白水解活性，尤其是梭菌蛋白酶活性。它通常用于心脏（心肌细胞），骨骼，肌肉，甲状腺，软骨和内皮细胞。
CLS 3	所有活动均低于平均水平。低酪蛋白酶和低蛋白水解活性。它通常用于乳腺细胞和其他软组织。
CLS 4	由于胰蛋白酶活性低而被选择。需要高胶原酶。它通常用于胰岛和其他受体完整性至关重要的应用中。